腸桿菌科的分類及鑒定流程（1）【克氏雙糖鐵（KIA）實(shí)驗(yàn)】

1.克氏雙糖鐵瓊脂（Kligler Iron Agar, KIA）是一種常用的鑒別培養(yǎng)基，主要用于區(qū)分腸桿菌科細(xì)菌。通過觀察細(xì)菌在KIA上的生長和代謝反應(yīng)，可以推斷細(xì)菌的糖發(fā)酵能力和硫化氫（H?S）產(chǎn)生能力。

2.原理：

培養(yǎng)基含有葡萄糖和乳糖（1:10），指示劑為酚紅。酚紅在不同的PH值時發(fā)生顏色變化，<6.8時變?yōu)辄S色，ph>8.4時變?yōu)榧t色。KIA的斜面部分暴露在空氣中，為有氧環(huán)境，培養(yǎng)基下部與空氣隔絕是相對厭氧環(huán)境。

細(xì)菌一般分為以下幾種情況

如細(xì)菌只分解葡萄糖，不分解乳糖，起初，細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，可以使斜面和底部都變?yōu)辄S色。然而，接下來，葡萄糖消耗殆盡，細(xì)菌開始利用含氮物質(zhì)產(chǎn)生堿性物質(zhì)，抵消了斜面中少量的酸，使得斜面顏色變紅。而底層由于缺氧，氨基酸降解產(chǎn)生的堿性物質(zhì)無法中和細(xì)菌產(chǎn)生的酸，因此仍為黃色。因此，KIA上的堿-斜-酸反應(yīng)是非乳糖發(fā)酵菌的重要標(biāo)志。

如細(xì)菌可以發(fā)酵乳糖，那么在葡萄糖被消耗后，仍可以利用乳糖發(fā)酵，斜面和底部都會出現(xiàn)黃色。

如細(xì)菌產(chǎn)氣，可有氣泡，或者使培養(yǎng)基出現(xiàn)斷層。

如細(xì)菌產(chǎn)生H2S，則使培養(yǎng)基形成黑色。