在世界各地的實驗室中，將細菌甘油菌種保存在-80°C是一種常見的做法，這種方法能夠長期保存細菌菌株。對于依賴這些菌種來保證實驗一致性和可重復性的研究人員來說，這些菌種在保持活性的前提下能夠保存多久至關重要。當細菌在-80 ℃的甘油溶液中保存時，甘油起到冷凍保護劑的作用。這可以防止冰晶的形成，從而避免對細胞結構造成損害，進而延長細菌培養物的壽命并提高其活性。通常使用15-25%的甘油濃度，使細菌細胞保持休眠狀態，以便在需要時被激活。很多人以為“凍上就行”，把感受態細胞隨手塞進-20℃冰箱其實是大錯特錯。研究發現，在-20℃下，感受態細胞幾天之內就能丟掉90%以上的轉化效率！為什么？因為-20℃雖然看著也結冰了，但分子運動還沒慢到足夠保護細胞膜的地步。

NEB方面的實驗表明大腸桿菌感受態細胞（NEB #C2987H）在-20°C下儲存24小時后，失去94.5%的轉化效率。 2天后失去98.9%的轉化效率，儲存一周，減少99.6%轉化效率。Koenig GL等進行了一項時間跨度達10年的研究，結果顯示重組E.coli 在-20 ℃保存10個月后，質粒保留率下降20-40%（無抗生素選擇時更高），復蘇后菌落中無質粒比例達15%。追蹤10年細胞庫顯示-80 ℃下10年質粒保留率>95%，而-20 ℃下早期質粒就發生顯著丟失。

主流商用感受態細胞的產品說明書都寫得清清楚楚，在-80℃左右儲存、避免反復凍融，部分產品未明確說明保存期限，但是寫了解凍后應立即使用，長時間放置會降低轉化效率。細胞這轉化效率為10?–10? cfu/μg甚至更高。部分產品明確說明6個月保質期，超過這個期限，廠家不再保證轉化效率，但細胞并不會立刻死亡，只是轉化效率會緩慢下降。

每次從-80℃拿出來化凍，再放回去，就等于給細胞來了一次“折磨”。數據顯示，每經歷一次完整的凍融循環，轉化效率差不多掉一半！兩三次下來，你的“高效率感受態”可能就變成“勉強能用”了。 所以最明智做法是一開始就分裝成單次使用的小管（比如100 μL/管），用的時候一次性拿幾管出來，用不完的直接丟棄。

常規單質粒克隆、藍白斑篩選、點突變驗證、BL21蛋白表達，這些只要長出幾個到幾十個菌落就成功，老細胞完全可以上，也夠用。但構建文庫、多片段拼接、轉化大片段或低拷貝質粒時，轉化效率直接決定多樣性或成功率，這時候超過一年的細胞最好別冒險。

轉化效率（Transformation Efficiency）的單位是：cfu/μg（每微克DNA得到的菌落形成單位）。這是衡量感受態細胞好壞的黃金標準。下面以最常見的DH5α轉化實驗為例，手把手教你怎么算。

轉化效率（cfu/μg）=(長出來的菌落數) ÷ (實際使用的質粒DNA量，μg)

計算步驟

1.取50 μL DH5α感受態細胞（冰上化凍）；

第一，全程-80℃保存，不進-20℃；第二，制備后立即單次分裝；第三，放在冰箱內部穩定區域，避免開門溫度波動；第四，貼好制備日期，用多少拿多少；第五，解凍即用，不在冰上長時間放置。