WB 曝光原理
Western Blot (WB) 作為核心的蛋白質檢測技術，其原理建立在抗原-抗體特異性結合之上。從蛋白經PAGE電泳按分子量精確分離，到高效轉移至PVDF或NC膜，再到一抗通過Fab區CDR精準鎖定目標表位，二抗結合Fc段并攜帶HRP/AP等標記酶放大信號，最終通過酶促顯色（如DAB沉淀）或化學發光（如HRP-魯米諾、AP-CDP Star系統）實現目標蛋白的可視化——每一步都環環相扣，精密嚴謹。
然而，曝光結果不佳時，除了常規的抗體效價、轉膜效率、封閉充分性等因素，翻譯后修飾（PTMs）常成為被忽視的“幕后推手”。磷酸化、糖基化、乙酰化等PTMs可顯著改變蛋白質的：
分子量與遷移率：導致條帶位置異常，偏離預期。
構象與表位可及性：關鍵抗原表位可能被修飾基團遮蔽或改變，阻礙一抗有效結合。
與封閉劑/試劑的相互作用：例如，磷酸化蛋白檢測中，脫脂奶粉封閉劑所含的磷酸酶可能降解目標表位，而其中的酪蛋白磷酸化背景易導致高噪音——此時必須選用BSA或無蛋白封閉劑。
如何破局？精準實驗設計是關鍵！
預判PTM影響：根據目標蛋白特性，針對性優化樣品處理（如磷酸酶抑制劑）、電泳條件、封閉劑及抗體選擇。
驗證工具輔助：使用PTM特異性抗體或去修飾處理作為對照。
