原位雜交定位
原位雜交定位(in situ hybridization) 這是分子水平和染色體水平相結(jié)合的基因定位方法。將待定位基因的特定DNA序列或該基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的RNA分子作為探針，在標(biāo)記了放射性同位素或非放射性化學(xué)物質(zhì)后與變性后的染色體DNA雜交，該探針就會同染色體DNA中與其互補(bǔ)的序列結(jié)合成為雙鏈，通過放射自顯影或顯色技術(shù)，就可將標(biāo)記了放射性同位素或非放射性化學(xué)物質(zhì)的探針在染色體上的位置，達(dá)到基因定位的目的。
原位雜交基因定位的精度取決于兩個(gè)因素。一是染色體顯帶分辨的精細(xì)程度。如果染色體是一般的常規(guī)染色，則定位只能區(qū)分出位于染色體的長臂或短臂，靠近著絲粒或端粒。如果染色體作分帶顯色，基因就可定位在染色體的某一區(qū)帶上。染色體顯帶越精細(xì)，則定位也可相應(yīng)地提高其精度。
另一個(gè)因素是探針標(biāo)記的靈敏度。當(dāng)用放射性同位素磷(32P)標(biāo)記探針，雜交后作放射自顯影后得到的雜交信號往往很強(qiáng)，會覆蓋染色體上很大的區(qū)段，不易確定與探針同源的序列所在的精確位置。改用放射性同位素硫(35S)后，情況稍有改善。用非放射性化學(xué)物質(zhì)如熒光素標(biāo)記探針后，則在熒光顯微鏡下，探針?biāo)诘奈恢蒙峡沙尸F(xiàn)出熒光，這稱為熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)。當(dāng)采用可呈現(xiàn)不同顏色的熒光素標(biāo)記不同基因的探針后，可在同一個(gè)中期染色體標(biāo)本上同時(shí)定位幾個(gè)基因。這種技術(shù)同樣可用于檢測染色體的易位畸變。例如，用某條染色體所特有的重復(fù)序列作為探針，當(dāng)該條染色體的一個(gè)片段易位到另一條染色體上時(shí)，易位的那個(gè)片段將同熒光標(biāo)記的探針結(jié)合而呈現(xiàn)出一片熒光，很易識別。同樣，不同的探針標(biāo)記了不同顏色的熒光素后，染色體將被染成色彩斑斕的圖像。這稱為染色體涂染(chromosome painting)。
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