糖鏈的序列測定—高碘酸氧化法
【實(shí)驗(yàn)原理】
高碘酸可以選擇性地氧化和斷裂糖分子中連二羥基或連三羥基處，生成相應(yīng)的多糖醛、甲醛或甲酸。反應(yīng)定量地進(jìn)行，每開裂—個C-C鍵消耗一分子高碘酸。通過測定高碘酸消耗量及甲酸的釋放量，可以判斷多糖分子中糖苷鍵的位置、類型、多糖的分枝數(shù)目和取代情況等。
【實(shí)驗(yàn)材料】
1. 實(shí)驗(yàn)器材
紫外分光光度計(jì)。
2. 實(shí)驗(yàn) 試劑
(1)溴甲酚藍(lán)指示劑:0.1克溴甲酚藍(lán)溶于250ml蒸餾水中（含1.43毫升0.1mol/L氫氧化鈉）。
(2) 30mmol/L高碘酸鈉溶液。
(3) 乙二醇。
(4) 0.01mol/L氫氧化鈉溶液。
【實(shí)驗(yàn)操作】
1. 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：
取6支干燥 試管 ，按下表操作
管號 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
高碘酸鈉（ml） | 0 | 0.5 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 4.0 |
蒸餾 水（ml） | 4.0 | 3.5 | 3.0 | 2.5 | 2.0 | 0 |
各取0.1 ml，定容至25 ml，在223nm處測定光密度 | ||||||
A 223 | ||||||
橫坐標(biāo)為高碘酸鈉毫摩爾數(shù)，縱坐標(biāo)為光密度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 樣品測定
稱取多糖樣品25mg，用少量水溶解，加入30mmol/L高碘酸鈉溶液,定容至25ml，置于暗處,室溫下進(jìn)行反應(yīng)，于0，6，12，24，36，48…小時間隔取樣0.1 ml， 蒸餾 水稀釋250倍后，使用紫外 分光光度計(jì) 在223nm處測定光密度。至光密度值達(dá)一穩(wěn)定值時，加乙二醇破壞過量的高碘酸以終止反應(yīng)。由此光密度值根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出高碘酸的消耗量。取2ml上述反應(yīng)溶液，測定甲酸的生成量。剩余部分進(jìn)行Smith降解。
3. 甲酸測定：
取2ml上述反應(yīng)溶液，加一滴溴甲酚藍(lán)作指示劑，用0.01mol/L氫氧化鈉溶液滴定甲酸的釋放量。
【注意事項(xiàng)】
為避免發(fā)生超氧化，反應(yīng)溶液的pH值應(yīng)控制在3~5，而且一定要在低溫、避光處進(jìn)行
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