菌株復蘇與傳代

• 菌株復蘇

• 菌株復蘇前，根據菌株生長特性，確定合適培養基和培養環境（需氧或二氧化碳），準備復蘇用品（如槍頭、移液器、接種環、培養基、目標菌株、生理鹽水等）。菌株復蘇根據保藏形式不同，復蘇過程有所區別：

• 甘油凍存的菌株：在室溫解凍，恢復室溫后，使用移液器吸取適量（如30-50 μl）溶解的菌液，轉移至平板中，使用接種環按照分區劃線方式完成接種。

• 凍干粉的菌株：可以直接挑取部分凍干粉至平板中，也可以加入少量生理鹽水或者肉湯培養基（非選擇性的），將其溶解，再使用移液器吸取適量溶解菌液至平板，使用接種環按照分區劃線方式完成接種。

• 磁珠保存的菌株：挑取單個磁珠，在平板中滾動數次即可。

• 注意事項：所有操作應遵循微生物實驗室生物安全和無菌操作規則，完成接種后，在平板上標記菌株信息（如菌株名稱/編號、傳代數、日期等）。

• 菌株傳代

• 菌株復蘇后，在實驗前，一般會進行一次傳代，以確保能夠獲得生長良好的菌落/培養物，該過程與菌株復蘇操作類似，區別是將第一代菌株重新接種一次，不過此過程需要注意菌株的純度：

• 根據菌落形態特征（菌落大小、顏色、形狀、邊緣、透明度、溶血環等宏觀形態，菌體大小、形狀的著生位置等微觀形態）判斷菌株純度，在相同培養條件下，同一菌株的菌落形態特征應該是相同的，如出現不同菌落形態或與預期菌株生長特點不一致，應對其進行確認（如革蘭氏染色、生理生化檢測、質譜鑒定、測序鑒定等）。

• 如已確定為菌株污染，可以選擇目標菌株的單菌落進行傳代，若無法確定目標菌株時，應重新復蘇或傳代，同時銷毀被污染的培養物。