酶的性質(zhì)實驗—pH對酶活力的影響
【實驗原理】
酶活力受環(huán)境pH的影響，在一定pH下，酶表現(xiàn)最大活力，高于或低于此pH，酶活力降低，通常把表現(xiàn)出酶最大活力的pH稱為該酶的最適pH。pH影響酶活力的主要原因有以下幾個方面，首先，pH影響酶分子活性部位上有關(guān)基團的解離，另外，也影響底物的解離狀態(tài)，從而影響酶活性中心與底物的結(jié)合或催化。其次，有關(guān)基團解離狀態(tài)的改變影響酶的空間構(gòu)象，甚至?xí)姑缸冃浴１M管有一些酶能忍受較大的pH的變化，但大多數(shù)酶保持活性的pH值范圍很窄。正因如此，生物體使用緩沖液調(diào)節(jié)體內(nèi)的適宜pH值。
【實驗材料】
1. 實驗器材
試管及試管架；漏斗及濾紙；恒溫水浴鍋；溫度計；移液管
2. 實驗 試劑
⑴ 1% 酪蛋白溶液：同酶的特異性實驗
⑵ 1/2000堿性蛋白酶溶液：同酶的特異性實驗
⑶ pH10 硼砂氫氧化鈉緩沖液: 同酶的特異性實驗
⑷ 0.1mol/L鹽酸
⑸ 0.2 mol/L 氫氧化鈉溶液
⑹ 0.4 mol/L碳酸鈉溶液
⑺ 0.4 mol/L三氯醋酸溶液
⑻ 福林 試劑 : 同的酶特異性實驗
【實驗操作】
取三支 試管 , 按下表加入試劑：
試劑 | 試管 編號 | ||
1 | 2 | 3 | |
1% 酪蛋白溶液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
pH10 緩沖液(ml) | 1.0 | — | — |
0.1M HCl(ml) | — | 1.0 | — |
0.2M NaOH 溶液(ml) | — | — | 1.0 |
1/2000堿性蛋白酶溶液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
實驗現(xiàn)象 | |||
混合均勻后，于40℃ 水浴 中保溫15分鐘。 然后每管各加入0.4M 三氯醋酸溶液3.0ml，分別過濾，各吸取濾液1.0ml，加0.4M碳酸鈉溶液5.0ml，福林試劑1.0ml，搖勻，于40℃ 水浴 保溫15分鐘，觀察現(xiàn)象，比較在不同pH下，堿性 蛋白酶 活力的大小。
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