LCR
連接酶鏈反應(Ligase chain reaction，LCR)，是一種新的DNA體外擴增和檢測技術，主要用于點突變的研究及靶基因的擴增.
連接酶鏈反應是Backman1997年為檢出靶基因序列中的點突變而設計發(fā)明，并申報了專利.1988年Landegren也進行了該項研究.1988年Backman等又因分離熱穩(wěn)定的連接酶，而申報專利，1991年Backman和Barany分別用耐熱DNA連接酶進行了LCR試驗.耐熱DNA連接酶可以在熱循環(huán)中保持活性，提高連接反應的特異性，排除了背景擴增和免除了不斷補充酶的繁瑣程序.
LCR的基本原理為利用DNA連接酶.特異地將雙鏈DNA片段連接，經(jīng)變性-退火-連接三步驟反復循環(huán)，從而使靶基因序列大量擴增.其程序為:在模DNA、DNA連接酶、寡核苷酸引物以及相應的反應條件下，首先加熱至一定溫度下(94～95℃)使DNA變性，雙鏈打開，然后降溫退火(65℃)，引物與之互補的模板DNA結合并留下一缺口，如果與靶序列雜交的相鄰的寡核苷酸引物與靶序列完全互補，DNA連接酶即可連接封閉這一缺口，則LCR反應的三步驟(變性-退火-連接)就能反復進行，每次連接反應的產物又可在下一輪反應中作模板，使更多的寡核苷酸被連接與擴增.若連接處的靶序列有點突變，引物不能與靶序列精確結合，缺口附近核苷酸的空間結構發(fā)生變化，連接反應不能進行，也就不能形成連接產物.
LCR的引物是兩對分別互補的引物，引物長度為20～26個，以保證引物與靶序列的特異性結合，LCR識別點突變的特異性高于PCR，其特異性首先取決于引物與模板的特異性結合，其次是耐熱連接酶的特異性.LCR連接反應溫度接近寡苷酸的解鏈溫度(Tm)，因而識別單核苷酸錯配的特異性極高.
LCR的擴增效率與PCR相當，用耐熱連接酶做LCR只用兩個溫度循環(huán)，94℃min變性和65℃復性并連接，循環(huán)30次左右.其產物的檢測也較方便靈敏.目前該方法主要用點突變的研究與檢測、微生物病原體的檢測及定向誘變等，還可用于單堿基遺傳病多態(tài)性及單堿基遺傳病的產物診斷，微生物的種型鑒定，癌基因的點突變研究等.
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