肝的生酮作用及酮體檢出
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/strong>
1.了解酮體生成的特點(diǎn)和意義；
2.掌握酮體檢出的方法
【實(shí)驗(yàn)原理】
酮體是乙酰乙酸、β-羥丁酸及丙酮3種物質(zhì)的總稱。酮體是脂肪酸在肝臟氧化分解時(shí)形成的特有中間代謝物，是在特殊情況下肝臟向外輸出能源的一種特殊方式。酮體代謝的重要特征是肝內(nèi)生酮肝外用。
在正常情況下，糖供應(yīng)充分，生物體主要依靠糖的有氧氧化供能，脂肪動(dòng)員較少。血中僅含少量酮體，約0.05～0.85mmol/L(0.3～5mg
)。腦組織不能氧化脂肪酸，卻能利用酮體。
在饑餓、糖尿病、高脂低糖膳食等情況下，酮體生成增加，小分子水溶性的酮體易通過(guò)血腦屏障和肌肉毛細(xì)血管壁，作為肌肉尤其是腦組織的重要能源。當(dāng)肝內(nèi)生酮的速度超過(guò)肝外組織利用酮體的能力時(shí)，導(dǎo)致血中酮體含量異常升高，稱為酮血癥。
此時(shí)尿中也可出現(xiàn)大量酮體，稱為酮尿癥。乙酰乙酸和β-羥丁酸都是較強(qiáng)的有機(jī)酸，當(dāng)血中酮體過(guò)高時(shí)，易使血液pH下降導(dǎo)致酸中毒。酮癥酸中毒是一種臨床常見(jiàn)的代謝性酸中毒。因此，酮體的檢出在臨床上有重要的意義。
代謝性酸中毒治療時(shí)除對(duì)癥給予堿性藥物外，糖尿病人給予胰島素和葡萄糖，以糾正糖代謝紊亂，增加糖的氧化供能，減少脂肪動(dòng)員和酮體的生成。
以丁酸作為底物與肝組織勻漿(內(nèi)含合成酮體的酶系)保溫后，即有酮體生成。酮體可與顯色粉(亞硝基鐵氰化鈉等)產(chǎn)生紫紅色物質(zhì)反應(yīng)；而經(jīng)同樣處理的肌肉勻漿則不產(chǎn)生酮體，故無(wú)顯色反應(yīng)。
【器材和試劑 】
1. 器材 試管及試管架、剪刀、恒溫水浴箱、勻漿器、研缽、離心機(jī)
2. 試劑
(1)肝勻漿和肌肉勻漿。
(2)0.9％NaCl溶液。
(3)羅氏溶液：NaCl 0.9g/>，KCl 0.042g/>，CaCl 2 0.024g/>，NaHCO 3 0.02g/>，葡萄糖 0.1g/>，溶解后加蒸餾水至100ml。
(4)0.5mol／L丁酸：取 44.0g/>丁酸溶于0.1mol/LNaOH溶液中，并用0.1mol/L NaOH溶液稀釋至1000ml。
(5)1/15mol/L磷酸緩沖液(pH7.6)。
(6)15％三氯醋酸。
(7)酮體溶液。
(8)顯色粉：亞硝基鐵氰化鈉 1g/>、無(wú)水碳酸鈉 30g/>，硫酸銨 50g/>，混合后研碎。
3.動(dòng)物 小鼠
【操作步驟】
(1)肝勻漿和肌肉勻漿的制備：取小鼠1只，斷頭處死，迅速剖腹，取出全部肝臟和部分肌肉組織，分別置于研缽中，用剪刀剪碎，加入生理鹽水(按重量／體積＝1∶3)和少許細(xì)砂，研磨成勻漿。
(2)取 試管 2支，編號(hào)，按下表操作：
將1號(hào)和2號(hào) 試管 分別搖勻混和5min，離心沉淀約5min(3000r／min)，并取出上清液1號(hào)和2號(hào)備用。
(3)另取 試管 5支，編號(hào)，按下表操作：
(4)各管加顯色粉1小匙(高粱米粒大)，觀察各管顏色反應(yīng)，并解釋之。
【思考題】
從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中反映出酮體代謝組織的特點(diǎn)是什么？
試驗(yàn)中三氯醋酸的作用是什么？
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